Αναστολή αντίδρασης αιμοσυγκόλλησης

σερόλ. αντιδράσεις που βασίζονται στην αναστολή της συγκόλλησης των ερυθροκυττάρων. Χρησιμοποιούνται δύο τύποι αιμοσυγκόλλησης: αντίδραση αναστολής της ενεργητικής (RTHA) και παθητικής (RPHA) αιμοσυγκόλλησης. RTGAχρησιμοποιείται για την οροδιάγνωση ιογενών λοιμώξεων και τον τύπο άγνωστων ιών. Στην πρώτη έκδοση, σε μια σειρά διπλών αραιώσεων s-k-b-nogoλαμβάνεται κατά την έναρξη της νόσου και μετά από 10-14 ημέρες σε όγκο 0,25 ml, προσθέστε 0,25 ml τυπικού ιογενούς διαγνωστικού. Μετά από έκθεση μιας ώρας στο θερμοκρασία δωματίου 0,5 ml ενός εναιωρήματος 1% ερυθροκυττάρων κοτόπουλου προστίθεται σε κάθε δοκιμαστικό σωλήνα (φρεάτιο). Μετά από 30 - 60 λεπτά καθορίζονται τα τελευταία και στις δύο σειρές εκτροφής σ-κ, στο οποίο διαπιστώθηκε αναστολή (απουσία) αιμοσυγκόλλησης. Εάν ο τίτλος Ab αυξηθεί κατά 4 φορές ή περισσότερο, δίνεται μια θετική απάντηση, σε άλλες περιπτώσεις - μια αρνητική απάντηση. Για τον προσδιορισμό των ιών, προετοιμάστε μια σειρά διπλών αραιώσεων της τυπικής δοκιμασίας σε όγκο 0,25 ml, προστίθεται ίσος όγκος δοκιμής σε κάθε αραίωση. ιικό εναιώρημα με δραστηριότητα 4 αιμοσυγκολλητικών μονάδων. (δόση), διατηρείται σε θερμοκρασία δωματίου για 1 ώρα και προσθέτουμε 0,5 ml εναιωρήματος 1% ερυθροκυττάρων κοτόπουλου. Η λογιστική πραγματοποιείται με τον ίδιο τρόπο όπως στην προηγούμενη έκδοση. Ο ιός αναγνωρίζεται ως πανομοιότυπος με τον ιό εάν ο RTHA φτάσει σε έναν τίτλο ή στο 1/2 τίτλο του τυπικού ιού. Εκτός από αυτήν και άλλες επιλογές, τοποθετούνται 3 έλεγχοι: s-ki, ιός, ερυθροκύτταρα. RTPGA

συνήθως πραγματοποιείται για την ανίχνευση βακτηριακών, μυκητιακών, πρωτοζωικών Ags (haptens) στην έρευνα. υλικό. Είναι ιδιαίτερα ευαίσθητο, συγκεκριμένο, αλλά απαιτεί ένταση εργασίας. Το RTPGA πραγματοποιείται επίσης σε 2 στάδια. Στο 1ο στάδιο, σε μια σειρά διπλών αραιώσεων, έρευνα. Ένας ίσος (συνήθως 0,25 ml) όγκος ενός τυπικού ανοσοποιητικού συστήματος που λαμβάνεται σε δόση εργασίας προστίθεται στο υλικό Ag. Οι δοκιμαστικοί σωλήνες διατηρούνται σε θερμοστάτη για 2 ώρες, παρουσία του αντίστοιχου Ag στο υλικό, πραγματοποιείται δέσμευση του Ab και με την επακόλουθη προσθήκη ερυθροκυτταρικού διαγνωστικού σε έναν αριθμό δοκιμαστικών σωλήνων (και ανάλογα με την ποσότητα του Ag). , αναστέλλεται η συγκόλληση των ευαισθητοποιημένων ερυθροκυττάρων. Το πείραμα συνοδεύεται από ελέγχους κυττάρων, ερυθροκυττάρων και υλικού.

(Πηγή: Λεξικό Μικροβιολογικών Όρων)

Δείτε τι είναι η "αντίδραση αναστολής της αιμοσυγκόλλησης" σε άλλα λεξικά:- Εργαστήριο RTGA, ορολογική μέθοδος. [Αγγλο-ρωσικό γλωσσάρι βασικών όρων στην εμβολιολογία και την ανοσοποίηση. Παγκόσμιος Οργανισμός Υγείας, 2009] Θέματα εμβολιολογία, ανοσοποίηση Συνώνυμα της αναστολής αιμοσυγκόλλησης RTHA EN... ... Οδηγός Τεχνικού Μεταφραστή

- (RTGA) μέθοδος για τον εντοπισμό ενός ιού ή την ανίχνευση αντιιικών αντισωμάτων στον ορό αίματος ενός ασθενούς, με βάση το φαινόμενο της απουσίας συγκόλλησης των ερυθρών αιμοσφαιρίων από ένα φάρμακο που περιέχει έναν ιό παρουσία ορού αίματος που έχει ανοσία σε αυτόν. . Μεγάλο ιατρικό λεξικό

RTGA

RTG- Αντίδραση αναστολής αιμοσυγκόλλησης... Λεξικό ρωσικών συντομογραφιών

- (όψιμη λατ. infectio μόλυνση) μια ομάδα ασθενειών που προκαλούνται από συγκεκριμένα παθογόνα, που χαρακτηρίζονται από μολυσματικότητα, κυκλική πορεία και σχηματισμό μεταμολυσματικής ανοσίας. ο όρος " μολυσματικές ασθένειες"παρουσιάστηκε...... Ιατρική εγκυκλοπαίδεια

Αυτή η σελίδα είναι ένα γλωσσάρι. # Α... Βικιπαίδεια

Βασικές συντομογραφίες που υιοθετήθηκαν στο Veterinary Encyclopedic Dictionary- a., aa, artena, arteriae aa ana (εξίσου) ΕΣΣΔ Ακαδημία Ιατρικών Επιστημών ΕΣΣΔ Ακαδημία Ιατρικών Επιστημών ΕΣΣΔ Ακαδημία Επιστημών ΕΣΣΔ Ακαδημία Επιστημών ΕΣΣΔ Bac. Bacillus Bact. Βακτήριο BSSR Λευκορωσική SSR αιώνας, αιώνες. αιώνα, αιώνες v., vv. vena, venae VASKHNIL Πανενωσιακό Τάγμα Λένιν και... ... Κτηνιατρικό εγκυκλοπαιδικό λεξικό

Το Ag antigen AE είναι ένα αντιτοξικό ή αντιγονικό αντιβακτηριακό μονάδα. αντιβακτηριακό αντίσωμα Ab ATP βακτήριο αδενοσίνης τριφωσφορικού οξέος. βακτηριακό βακτηριο βακτηριολογικό βακτηριοσκόπιο. βακτηριοσκοπική βακτηριοκτόνος δράση BAS... ... Λεξικό μικροβιολογίας

- (από το λατ. serum serum και... Logia) κυριολεκτικά το δόγμα των ιδιοτήτων του ορού αίματος? Το S. συνήθως νοείται ως ο κλάδος της ανοσολογίας που μελετά την αλληλεπίδραση αντισωμάτων (Βλ. Αντισώματα) του ορού με αντιγόνα (Βλ. Αντιγόνα). Ορολογικές αντιδράσεις...... Μεγάλη Σοβιετική Εγκυκλοπαίδεια

ΑΙΜΟΓΛΥΤΙΝΩΣΗ(ελληνικά, haima blood + λατ. agglutinatio κόλληση) - το φαινόμενο της κόλλησης των ερυθρών αιμοσφαιρίων. Η αιμοσυγκόλληση μπορεί να είναι άμεση, δηλ. να συμβεί λόγω της άμεσης επίδρασης ορισμένων παραγόντων στα ερυθρά αιμοσφαίρια και έμμεση (παθητική), όταν τα ερυθρά αιμοσφαίρια που έχουν υποστεί αγωγή με αντιγόνο (ή αντισώματα) συγκολλούνται, αντίστοιχα, από ανοσοορό (ή αντιγόνο) .

Η άμεση αιμοσυγκόλληση μπορεί να προκληθεί από ορούς κατά των ερυθροκυττάρων, εκχυλίσματα από σιελογόνους ιστούς, ορό ανθρώπου και ζώων, καθώς και από ορισμένα βακτήρια (σταφυλόκοκκοι, Escherichia coli, μικρόβια τυφοειδή, παρατυφοειδή, δυσεντερία) και πολλούς ιούς. Η συγκόλληση των ερυθροκυττάρων από τους φυσιολογικούς ορούς διακρίνεται σε ισοαιμοσυγκόλληση, εάν ο ορός και τα ερυθροκύτταρα ανήκουν σε άτομα του ίδιου είδους, και σε ετεροσυγκόλληση, όταν συμβαίνει προσκόλληση ξένων ερυθροκυττάρων.

Ο ορός μπορεί να αποκτήσει την ικανότητα να Γ. σε ορισμένες ασθένειες. Έτσι, για παράδειγμα, ο ορός ασθενών με λοιμώδη μονοπυρήνωση συγκολλεί τα ερυθροκύτταρα προβάτου (βλέπε αντίδραση Paul-Bunnell).

Το Ζ. που προκαλείται από ιούς έχει μεγάλη θεωρητική και πρακτική σημασία. Περιγράφηκε για πρώτη φορά το 1941 από τους G. K. Hirst, L. Mac Clelland, R. Hare. Διαπίστωσαν ότι ο ιός της γρίπης συγκολλεί τα ερυθρά αιμοσφαίρια του κοτόπουλου, με βάση τα οποία αναπτύχθηκε η αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (HRA). Στη συνέχεια, ανακαλύφθηκαν αιμοσυγκολλητικές ιδιότητες σε πολλούς ιούς. Η αιματορρόφηση σχετίζεται επίσης με το φαινόμενο του G., δηλαδή την ικανότητα των κυττάρων που έχουν μολυνθεί με ορισμένους αιμοσυγκολλητικούς ιούς να προσροφούν τα ερυθρά αιμοσφαίρια στην επιφάνειά τους (βλ. Αιμοπροσρόφηση). Η ικανότητα των ιών να προκαλούν αιμοσυγκόλληση καταστέλλεται από κατάλληλους αντιιικούς ορούς, οι οποίοι χρησιμοποιούνται στην αντίδραση αναστολής (εξάλειψης) της αιμοσυγκόλλησης (HRI).

Τα RGA και RTGA χρησιμοποιούνται ευρέως τόσο σε θεωρητικές μελέτες στον τομέα της ιολογίας όσο και στη διάγνωση ιογενών λοιμώξεων για την ένδειξη, αναγνώριση και ταξινόμηση ιών, καθώς και για την ανίχνευση αντιιικών αντισωμάτων (αντιαιμαγλουτινίνες) στον ορό αίματος ασθενών. . Έτσι, κατά την απομόνωση των ιών της γρίπης και της παρωτίτιδας, ο δείκτης είναι η συγκόλληση των ερυθροκυττάρων κοτόπουλου από το αλλαντοϊκό και το αμνιακό υγρό των μολυσμένων εμβρύων κοτόπουλου.

Για λόγους ταυτοποίησης, χρησιμοποιείται η επιλεκτική ικανότητα ορισμένων ιών να συγκολλούν έναν συγκεκριμένο τύπο ερυθρών αιμοσφαιρίων. Ο ιός της ιλαράς, για παράδειγμα, συγκολλεί μόνο τα ερυθροκύτταρα του πιθήκου και ο ιός της εγκεφαλομυοκαρδίτιδας του ποντικού συγκολλεί τα ερυθροκύτταρα προβάτου.

Στους περισσότερους ιούς, η αιμοσυγκολλητίνη (το υπόστρωμα που ευθύνεται για το G.) είναι δομικό στοιχείοβιριόν.

Σε ιούς των οποίων το καψίδιο καλύπτεται με εξωτερικό κέλυφος λιποπρωτεϊνών (ιοί γρίπης, παραγρίπη, οι περισσότεροι αρβοϊοί), η αιμοσυγκολλητίνη βρίσκεται σε αυτό το κέλυφος και σχετίζεται δομικά με το λεγόμενο. λάχνες. Σύμφωνα με τη χημεία Από τη φύση τους, οι αιμοσυγκολλητίνες αυτών των ιών είναι γλυκο- ή λιποπρωτεΐνες. Έτσι, η αιμοσυγκολλητίνη του ιού της γρίπης είναι ένα τετραμερές που αποτελείται από δύο ζεύγη γλυκοπρωτεϊνών με ένα κοινό mol. βάρους 150.000 Η αιμοσυγκολλητική γλυκοπρωτεΐνη του φακέλου των αρβοϊών της ομάδας Β έχει ένα mol. βάρος 50.000.

Σε ιούς που δεν έχουν εξωτερικό περίβλημα, η αιμοσυγκολλητίνη σχετίζεται με δομές καψιδίου. Έτσι, στους αδενοϊούς, τα ινίδια που αναδύονται από τα κορυφαία καψομερή έχουν αιμοσυγκολλητική δράση.

Η αιμοσυγκολλητίνη των ιών της ευλογιάς είναι λιποπρωτεΐνη και είναι ένα από τα προϊόντα αναπαραγωγής τους, αλλά, προφανώς, δεν περιλαμβάνεται στο ιοσωμάτιο, καθώς τα καθαρισμένα ιικά σωματίδια δεν προκαλούν G.

Το G. μπορεί να προκληθεί τόσο από μολυσματικά ιικά σωματίδια όσο και από αδρανοποιημένα, επομένως ο αιμοσυγκολλητικός τίτλος του ιού δεν αντικατοπτρίζει τη μολυσματική του δράση. Σε ορισμένες περιπτώσεις, η αιμοσυγκολλητίνη μπορεί να διαχωριστεί από το ιικό σωματίδιο (για παράδειγμα, σε αδενοϊούς). Ορισμένοι ιοί (γρίπη, ιλαρά, ECHO) μπορούν, κατά την αναπαραγωγή τους, να σχηματίσουν άδεια ιοσωμάτια χωρίς RNA, τα οποία έχουν επίσης αιμοσυγκολλητική δράση.

Ο μηχανισμός του Γ. μελετήθηκε από τον Ch. αρ. σε πειράματα με τον ιό της γρίπης. Η αλληλεπίδρασή του με τα ερυθρά αιμοσφαίρια περνά από δύο φάσεις - την προσρόφηση και την επακόλουθη έκλουση (βλ.). Το πρώτο στάδιο της προσρόφησης του ιού στα ερυθροκύτταρα είναι φυσικό. η διαδικασία καθορίζεται από τη διαφορά φορτίου και τη διαμοριακή έλξη (δυνάμεις van der Waals). Το δεύτερο στάδιο είναι το χημικό. αλληλεπίδραση του ιού με υποδοχείς ερυθροκυττάρων.

Ο μηχανισμός της διαδικασίας της ίδιας της κόλλησης των ερυθρών αιμοσφαιρίων δεν είναι απολύτως σαφής. Η αλλαγή στο ηλεκτροστατικό φορτίο των ερυθροκυττάρων μετά την προσρόφηση των ιών σε αυτά μπορεί να είναι σημαντική.

Είναι επίσης πιθανό τα ιικά σωματίδια να σχηματίζουν «γέφυρες» μεταξύ μεμονωμένων ερυθρών αιμοσφαιρίων.

Ο τόπος σύνδεσης του ιού της γρίπης και ορισμένων παραμυξοϊών με την επιφάνεια των ερυθροκυττάρων είναι οι υποδοχείς των τελευταίων, που είναι ο δισακχαρίτης 6-(Ν-ακετυλνεουραμινυλ) άλφα-D-N-ακετυλγαλακτοζαμίνη. Υπό την επίδραση του ιικού ενζύμου νευραμινιδάση, οι υποδοχείς των ερυθρών αιμοσφαιρίων χωρίζονται σε Ν-ακετυλογαλακτοζαμίνη και Ν-ακετυλνεουραμινικό οξύ.

Σε θερμοκρασία 37°, μετά από λίγες ώρες, ο ιός της γρίπης εκλούεται από τα ερυθρά αιμοσφαίρια. Σε ένα υπερτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου, αυτή η διαδικασία προχωρά πιο γρήγορα Λόγω της καταστροφής των υποδοχέων, τα ερυθρά αιμοσφαίρια χάνουν την ικανότητα να συγκολλούνται ξανά από τον ίδιο ιό, αν και μπορούν να κολλήσουν μεταξύ τους υπό την επίδραση πολλών άλλων ιών.

Οι γλυκοπρωτεϊνικοί υποδοχείς των ερυθροκυττάρων μπορούν επίσης να καταστραφούν από υπεριωδικό, θρυψίνη και διήθημα Vibrio cholerae που περιέχει νευραμινιδάση.

Οι περισσότεροι άλλοι ιοί (ευλογιά, αρβοϊοί κ.λπ.) δεν καταστρέφουν τους υποδοχείς των ερυθρών αιμοσφαιρίων. Η έκλουσή τους δεν συμβαίνει αυθόρμητα, αλλά υπό την επίδραση του ανοσοποιητικού ορού, αλλαγές στην ηλεκτρολυτική σύσταση του μέσου, στο pH του κ.λπ.

Ζ. εξαρτάται από τις ιδιότητες τόσο του ιού όσο και των ερυθροκυττάρων (Πίνακας).

ΙΟΙ ΙΚΑΝΟΙ ΝΑ ΠΡΟΚΑΛΟΥΝ ΣΥΓΚΟΛΛΗΣΗ ερυθροκυττάρων μερικών Σπονδυλωτών

Τύποι ιών	σπονδυλωτά
Αδενοϊοί
3, 7, 11, 14, 16, 20,	μαϊμούδες
8, 9, 10, 13, 15, 17, 19, 22, 23, 24, 26, 27	Λευκοί αρουραίοι
Αρβοϊοί αντιγονικών ομάδων Α, Β, υπερομάδας Bunyamwera
Ιός ερυθράς	Περιστέρι, χήνα
Ορθομυξοϊοί της ομάδας Α, Β, Γ	Άνθρωπος, κοτόπουλα, ινδικό χοιρίδιο
Ιοί ευλογιάς ευλογία, εμβόλια, ευλογιά πιθήκου, εκτρομελία	Ορισμένα άτομα κοτόπουλων
Παραμυξοϊοί
παρωτίτιδα, νόσος του Newcastle στα κοτόπουλα	Άνθρωπος, κοτόπουλα, ινδικό χοιρίδιο
parainfluenza NA-1, NA-2, NA-3	Άνθρωπος, κοτόπουλα, ινδικό χοιρίδιο
	μαϊμούδες
Πολυομαϊκοί ιοί ποντικού και ιός Κ	ινδικά χοιρίδια
Ραβδοϊοί της λύσσας, φυσαλιδώδης στοματίτιδα
Ρεοϊοί
Εντεροϊοί ECHO 3, 6, 7, 11, 12, 15, 19, 20, 21, 24, 25, 29, 30, 33
Α-20, Α-21, Α-24
	Ορισμένα άτομα κοτόπουλων
Β-1, Β-Ζ, V-5, V-6
εγκεφαλομυελίτιδα ποντικών GD VII
εγκεφαλομυοκαρδίτιδα

Η δραστηριότητα αιμοσυγκόλλησης είναι διαφορετική τόσο μεταξύ μελών της ίδιας ομάδας ταξινόμησης, όσο και μεταξύ διαφορετικών στελεχών του ίδιου ιού, ακόμη και μεταξύ μεμονωμένων κλώνων του ίδιου στελέχους. Για παράδειγμα, οι διαφορές στελεχών εκφράζονται σε εντεροϊούς ορισμένων οροτύπων. Στον πληθυσμό του ιού Coxsackie A-21, βρέθηκαν τόσο αιμοσυγκολλητικά σωματίδια όσο και εκείνα που δεν είχαν αυτή την ιδιότητα.

Για τη λήψη ορατού ιού, το ιικό εναιώρημα πρέπει να περιέχει τουλάχιστον 105-106 ιικά σωματίδια ανά 1 ml.

Η δραστηριότητα αιμοσυγκόλλησης ορισμένων ιών (π.χ. ιλαράς, παρωτίτιδας, ερυθράς) μπορεί να αυξηθεί με θεραπεία του ιικού εναιωρήματος με Tween-80 και αιθέρα, πιθανώς λόγω αποσάθρωσης του εξωτερικού περιβλήματος του ιού.

Το G. εξαρτάται επίσης από το περιβάλλον καλλιέργειας του ιού και από την παρουσία αναστολέων που εμποδίζουν αυτή τη διαδικασία.

Για παράδειγμα, κατά την καλλιέργεια του ιού Coxsackie A-21 σε μεταμοσχευμένα κύτταρα κακοήθους προέλευσης, παράγονται μόνο μη αιμοσυγκολλητικά σωματίδια. Η πηγή λήψης αιμοσυγκολλητικών αντιγόνων των αρβοϊών είναι το Ch. αρ. Ο εγκέφαλος των μολυσμένων θηλαζόντων ποντικών που περιέχει πολλούς αναστολείς G, επομένως, για την παρασκευή αυτών των αντιγόνων, χρησιμοποιείται εκχύλιση εγκεφαλικού ιστού με διάλυμα βορικού άλατος με pH 9,0, καθαρισμός με φρέον και καθίζηση με ακετόνη.

Η αποδέσμευση της αιμοσυγκολλητίνης με μεγάλη αποτελεσματικότητα μπορεί επίσης να επιτευχθεί με πρόσθετη επεξεργασία του εναιωρήματος με Tween-80 και αιθέρα, υπερηχογράφημα και θρυψίνη σε χαμηλές συγκεντρώσεις.

Σε ορισμένους ιούς, η ικανότητα πρόκλησης G. εξαρτάται από τον αριθμό των διόδων σε ένα συγκεκριμένο υπόστρωμα. Εδώ, η προσαρμογή του ιού στις συνθήκες καλλιέργειας και η αύξηση της δραστηριότητας της αναπαραγωγής του σε ένα επίπεδο όπου η συγκέντρωση των σωματιδίων του ιού γίνεται επαρκής για την εμφάνιση της ηπατίτιδας, μερικές φορές παρατηρείται μια αντίστροφη σχέση: με τον αριθμό των διόδους, η αιμοσυγκολλητική δραστηριότητα του ιού μειώνεται μέχρι να εξαφανιστεί τελείως. Ίσως η βάση αυτών των φαινομένων να είναι η επιλογή (κατά τις διελεύσεις) αιμοσυγκολλητικών ή μη σωματιδίων.

Μεταξύ των παραγόντων που χαρακτηρίζουν τα ερυθρά αιμοσφαίρια, το είδος τους έχει ιδιαίτερη σημασία.

Η ικανότητα των ερυθρών αιμοσφαιρίων να συγκολλούνται από έναν συγκεκριμένο ιό προσδιορίζεται εμπειρικά. Τυπικά, οι ιοί που ανήκουν στην ίδια ομάδα ταξινόμησης συγκολλούν τους ίδιους τύπους ερυθρών αιμοσφαιρίων. Ταυτόχρονα, σημασία έχουν και οι ατομικές ιδιότητες του δωρητή.

Ο Γ. επηρεάζεται επίσης από την ηλικία και το φύλο του δότη. Για παράδειγμα, ο ιός της δαμαλίτιδας συγκολλεί πιο ενεργά τα ερυθρά αιμοσφαίρια των ενήλικων κοτόπουλων από τα κοτόπουλα.

Για εργασία με αρβοϊούς, προτιμώνται τα ερυθροκύτταρα από νεαρά πτηνά. Επιπλέον, συνιστάται η χρήση ερυθρών αιμοσφαιρίων από γάντρες και όχι από χήνες, καθώς οι ορμονικές αλλαγές κατά την ωοτοκία και την επώαση των αυγών αλλάζουν τις επιφανειακές ιδιότητες των ερυθρών αιμοσφαιρίων, με αποτέλεσμα να γίνουν ανθεκτικά στη δράση του ιού ή επιρρεπείς σε αυθόρμητη συγκόλληση.

Τα ερυθροκύτταρα ορισμένων ζωικών ειδών (κουνέλια, αρουραίοι, ποντίκια) συχνά δίνουν αυθόρμητη συγκόλληση, η οποία πρέπει να λαμβάνεται υπόψη κατά την ανάπτυξη τυπικών συνθηκών δοκιμής για κάθε ιό. Τα ερυθροκύτταρα των πτηνών προτιμώνται από τα ερυθροκύτταρα θηλαστικών επειδή καθιζάνουν γρήγορα, δίνουν σαφή εικόνα και είναι λιγότερο επιρρεπή στην αυθόρμητη συγκόλληση. Κατά την εκτέλεση RGA με ορισμένους ιούς, για παράδειγμα, τον ιό της γρίπης, μπορούν να χρησιμοποιηθούν τόσο φρέσκα ερυθρά αιμοσφαίρια όσο και αυτά που έχουν διατηρηθεί με φορμαλίνη 25%.

Το G. εξαρτάται από τη σύνθεση ηλεκτρολυτών του μέσου, τη συγκέντρωση ιόντων υδρογόνου και τη θερμοκρασία. Σε περιβάλλον χωρίς ηλεκτρολύτες, η συγκόλληση των ερυθρών αιμοσφαιρίων από ιούς δεν συμβαίνει.

Υπάρχει ένα ορισμένο βέλτιστο στη σύνθεση ηλεκτρολυτών του μέσου. Για παράδειγμα, η προσρόφηση των αιμοσυγκολλητινών του ιού της δαμαλίτιδας σε ερυθροκύτταρα κοτόπουλου είναι μέγιστη σε 0,45-1,8% χλωριούχο νάτριο.

Το RGA έχει ρυθμιστεί στη θέση 4. 20-25 ή 37°. Ο ιός της γρίπης, για παράδειγμα, συγκολλά καλύτερα τα ερυθροκύτταρα σε θερμοκρασία 4°, ο ιός δαμαλίτιδας σε θερμοκρασία 37°, και για τους G. arboviruses η θερμοκρασία δεν έχει σημασία.

Οι απαιτήσεις διαφορετικών ιών για τη συγκέντρωση ιόντων υδρογόνου είναι επίσης διαφορετικές. Τα περισσότερα από αυτά προκαλούν G. σε pH 6,0-8,5. Ως εκ τούτου, ως μέσο χρησιμοποιείται συχνότερα ένα ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου και μερικές φορές προστίθεται σε αυτό ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικών 0,014 Μ με pH 7,2 (για ιούς με γρίπη, ιλαρά, δαμαλίτιδα κ.λπ.).

Οι αρβοϊοί, των οποίων η ικανότητα στο G. είναι πολύ αδύναμη, απαιτούν αυστηρά καθορισμένη συγκέντρωση ιόντων υδρογόνου: η απόκλιση από το βέλτιστο pH για κάθε ιό επιτρέπεται όχι περισσότερο από 0,3-0,4 μονάδες.

Δεδομένου ότι οι αιμοσυγκολλητίνες αυτών των ιών είναι σταθερές μόνο σε αλκαλικό περιβάλλον (σε pH 9,0) και η βέλτιστη ζώνη για RGA είναι μια ζώνη με pH 5,6-7,0, δημιουργείται η απαραίτητη συγκέντρωση ιόντων υδρογόνου τη στιγμή της σύνδεσης το αντιγόνο με τα ερυθροκύτταρα, προσθέτοντας στον ιό του αλκαλικού εναιωρήματος στα ερυθροκύτταρα σε ένα όξινο ρυθμιστικό διάλυμα.

Η σύνθεση των ρυθμιστικών διαλυμάτων μπορεί να επηρεάσει το φάσμα ευαισθησίας των ερυθροκυττάρων. Εάν, για παράδειγμα, σε ένα μέσο κανονικής σύνθεσης, ο ιός της ερυθράς συγκολλεί ερυθροκύτταρα κοτόπουλων, περιστεριών και χηνών, τότε όταν χρησιμοποιείται ρυθμιστικό διάλυμα HEPES 0,025 Μ (Ν-2-υδροξυαιθυλοπιπεραζίνη - Ν12-αιθανοσουλφουικό οξύ) pH 6,2 με την προσθήκη 0,4. M NaCl, 0,001 M CaCl2, 1% αλβουμίνη ορού βοοειδών και 0,00025% ζελατίνη, συγκολλεί επίσης ερυθροκύτταρα ενήλικων κοτόπουλων, ανθρώπων (ομάδα αίματος 0), πιθήκων, προβάτων, χοίρων, γατών, κουνελιών, αρουραίων, χάμστερ και ποντικών.

Για την επιβεβαίωση της ειδικότητας του ιού G., καθώς και για την ανίχνευση ιικών αντιαιμοσυγκολλητινών στους ορούς σε περίπτωση ορόλης, οι μελέτες χρησιμοποιούν RTGA. Η ειδικότητά του δεν είναι η ίδια για διαφορετικές ομάδες ιών. Για τους αρβοϊούς του γένους άλφα και φλαβοϊών, το RTGA είναι ειδικό για την ομάδα, δηλαδή αποκαλύπτει αντιγονικές συνδέσεις μεταξύ μελών μιας δεδομένης ομάδας. Αυτό καθιστά δύσκολη την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων ορολογικών μελετών όταν υπάρχουν αρκετοί ιοί της ίδιας ομάδας σε οποιαδήποτε περιοχή. Στους αδενοϊούς και ρεοϊούς, τα χαρακτηριστικά του τύπου αποκαλύπτονται χρησιμοποιώντας RTGA και στους ιούς της γρίπης, ανιχνεύονται ακόμη και ανεπαίσθητες διαφορές μεταξύ στελεχών του ίδιου είδους.

Για το RTGA είναι επιθυμητό να χρησιμοποιούνται πολύ ενεργά αντιγόνα. Τα αντιγόνα με χαμηλή δραστηριότητα συχνά περιέχουν πολλά μη αιμοσυγκολλητικά ιικά σωματίδια, τα οποία μπορούν να συνδυαστούν με αντισώματα και να παρεμποδίσουν την ανίχνευσή τους. Όταν χρησιμοποιούνται μολυσμένες κυτταροκαλλιέργειες ως πηγή αιμοσυγκολλητίνης, ο ορός αποκλείεται από το μέσο ή αφαιρούνται πρώτα οι αναστολείς G από αυτό.

G. αναστολείς ορού αποκλεισμού σύμφωνα με τη χημεία. σύνθεση είναι κυρίως βήτα λιποπρωτεΐνες, και το μέγεθος των μορίων είναι κοντά στα 198-αντισώματα. Οι οροί που εξετάστηκαν στο RTGA απελευθερώνονται από αναστολείς με θέρμανση στους t° 56 ή 62° για 30 λεπτά, επεξεργασία με διήθημα Vibrio cholerae ή νευραμινιδάση, θρυψίνη, προσρόφηση αναστολέων με καολίνη, καθίζηση αντισωμάτων με ακετόνη, επεξεργασία με μαγνήσιο και αιπαρίνχλη , επεξεργασία με θειική δεξτράνη και χλωριούχο ασβέστιο, επεξεργασία με ριβανόλη. Η αποτελεσματικότητα μεμονωμένων μεθόδων για την αφαίρεση διαφορετικών αναστολέων ποικίλλει. Οι τρεις πρώτες μέθοδοι είναι επαρκείς για την απομάκρυνση των αναστολέων του G. που προκαλούνται από τους ιούς της γρίπης και της παραγρίππης. Η επεξεργασία ορών με καολίνη και ακετόνη χρησιμοποιείται κατά την εργασία με αρβοϊούς, ριβανόλη, κατά τη μελέτη εντεροϊικές λοιμώξεις. Όταν ανιχνεύονται αντισώματα στον ιό της ερυθράς, χρησιμοποιείται θεραπεία με καολίνη, χλωριούχο μαγνήσιο και ηπαρίνη ή θειική δεξτράνη και χλωριούχο ασβέστιο.

Οι οροί που μελετήθηκαν στο RTGA απελευθερώνονται επίσης από συγκολλητίνες του τύπου των ερυθροκυττάρων που χρησιμοποιούνται στη σύνθεση-αντίδραση. Αυτό επιτυγχάνεται με την προσρόφηση συγκολλητινών με ένα συμπυκνωμένο εναιώρημα αυτών των ερυθρών αιμοσφαιρίων.

Τεχνική ρύθμισης RGA και RTGA

Οι αντιδράσεις πραγματοποιούνται σε δοκιμαστικούς σωλήνες ή σε οργανικές γυάλινες πλάκες με εσοχές. Η μικρομέθοδος που χρησιμοποιεί τον μικροτίτλο Takachi, που είναι ένα σύνολο μικρών πλακών με εσοχές σχήματος U, ένα σετ σταγονόμετρων και αραιωτικών, χρησιμοποιείται ευρέως. Ο όγκος του μίγματος αντίδρασης με τη μακρομέθοδο είναι 0,8 ml και με τη μικρομέθοδο - 0,1 ml. Τα ερυθρά αιμοσφαίρια χρησιμοποιούνται σε συγκέντρωση από 0,25 έως 1%. Για να εκτελέσετε RGA, συνδυάστε 0,2 (0,025) ml αντιγόνου, 0,2 (0,025) ml αλατούχου διαλύματος και 0,4 (0,05) ml εναιωρήματος ερυθρών αιμοσφαιρίων. Οι ίδιες αναλογίες συστατικών διατηρούνται στο RTGA, αλλά αντί για αλατούχο διάλυμα, προστίθεται ο υπό μελέτη ορός. Στο RGA, προσδιορίζεται ο τίτλος της αιμοσυγκολλητίνης, δηλαδή η υψηλότερη αραίωση, η οποία δίνει ένα διαυγές G. Η ποσότητα αιμοσυγκολλητίνης που περιέχεται σε 0,2 ml αυτής της αραίωσης θα είναι μία μονάδα αιμοσυγκολλητίνης (ΗΕ). Για την τιτλοδότηση ορών στο RTGA, ανάλογα με τα χαρακτηριστικά του ιού, χρησιμοποιούνται 4-8 μονάδες συγκόλλησης (AU).

Τα αποτελέσματα της αντίδρασης, δηλ. η παρουσία ή η απουσία του G. αξιολογείται από τη φύση του ιζήματος των ερυθροκυττάρων (Εικ.). Τα συγκολλημένα ερυθρά αιμοσφαίρια κατακάθονται ως μεμβράνη, μερικές φορές με οδοντωτές άκρες, που μοιάζει με αναποδογυρισμένη ομπρέλα. Ελλείψει συγκόλλησης, τα ερυθρά αιμοσφαίρια συσσωρεύονται στο κέντρο της κατάθλιψης με τη μορφή ενός συμπαγούς δίσκου. Ο χρόνος που απαιτείται για την καθίζηση των ερυθροκυττάρων κυμαίνεται από 45 λεπτά. έως 2 ώρες ανάλογα με τον τύπο των ερυθρών αιμοσφαιρίων, τον όγκο του μείγματος της αντίδρασης και τη θερμοκρασία. Τα «βαριά» πυρηνωμένα ερυθροκύτταρα των πτηνών εγκαθίστανται γρηγορότερα. Με περισσότερα υψηλή θερμοκρασίαΤο G. εμφανίζεται γρηγορότερα από ότι με ένα χαμηλότερο.

Η έμμεση (παθητική) αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (IRHA ή RPHA) έχει δύο κύριους τύπους: α) συγκόλληση ερυθροκυττάρων που ευαισθητοποιούνται με αντιγόνο από ανοσοορό. β) συγκόλληση ερυθροκυττάρων που ευαισθητοποιούνται από αντισώματα παρουσία αντιγόνου. Υπάρχουν δύο φάσεις της αντίδρασης. Κατά την πρώτη, μια αλλαγή στις επιφανειακές ιδιότητες των ερυθρών αιμοσφαιρίων συμβαίνει ως αποτέλεσμα της προσρόφησης αντιγόνων (ή αντισωμάτων) σε αυτά. Στη δεύτερη φάση, αντισώματα (ή αντιγόνα) απορροφώνται σε ευαισθητοποιημένα ερυθροκύτταρα και σχηματίζονται συσσωματώματα.

Για διαγνωστικούς σκοπούς με βακτηριακά αντιγόνα, το RNGA χρησιμοποιήθηκε από τους A. T. Kravchenko και M. I. Sokolov το 1946. Σε αλκαλικό περιβάλλον, το πολυσακχαριδικό αντιγόνο εκχυλίστηκε από βακτηριακά κύτταρα, προσροφήθηκε σε ανθρώπινα ερυθροκύτταρα της ομάδας 0 και συνδυάστηκε αμέσως με διαγνωστικό ορό. Η μέθοδος δεν απαιτεί την απομόνωση καθαρών βακτηριακών καλλιεργειών, καθώς η προσρόφηση αντιγόνου μπορεί να πραγματοποιηθεί απευθείας από το υλικό πατόλ. Χρησιμοποιώντας αυτή την τεχνική, κατέστη δυνατό να ανιχνευθεί μια τέτοια ποσότητα αντιγόνου σε 1 ml αλατούχου διαλύματος, που αντιστοιχεί σε 50-100 εκατομμύρια μικροβιακά σώματα, που προσδιορίζονται από ένα οπτικό πρότυπο.

Το RNGA σύμφωνα με τους Kravchenko και Sokolov και οι τροποποιήσεις του βρήκαν εφαρμογή στη βακτηριολογία, αλλά οι δυνατότητές του περιορίστηκαν από το γεγονός ότι μόνο πολυσακχαριδικά αντιγόνα, και όχι πρωτεΐνες, μπορούν να προσροφηθούν στα φυσικά ερυθροκύτταρα. Αλλά το 1951, ο S. V. Boyden έδειξε ότι τα ερυθρά αιμοσφαίρια που υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με τανίνη αποκτούν την ικανότητα να προσροφούν πρωτεΐνες στην επιφάνειά τους (βλέπε την αντίδραση του Boyden).

Το 1956, ο T. Rycaj τροποποίησε την τεχνική του Boyden: τα ερυθροκύτταρα ευαισθητοποιούνται με αντισώματα και χρησιμοποιούνται για την ανίχνευση διαφόρων αντιγόνων. Για την προσρόφηση στα ερυθροκύτταρα, χρησιμοποιείται ανοσοσφαιρίνη ανοσοποιητικών ορών. Το RNGA σύμφωνα με τον Knight μπορεί να χρησιμοποιηθεί όχι μόνο για την ένδειξη αντιγόνων, αλλά και για την τιτλοδότηση ορών, χρησιμοποιώντας το φαινόμενο της απόσβεσης ή αναστολής του RNGA. Σε αυτή την περίπτωση, ο ορός δοκιμής σε κατάλληλες αραιώσεις συνδυάζεται με το αντιγόνο έναντι του οποίου υποτίθεται ότι ανιχνεύονται αντισώματα και στη συνέχεια προστίθενται ευαισθητοποιημένα ερυθροκύτταρα. Παρουσία αντισωμάτων, το αντιγόνο δεσμεύεται σε αυτά και δεν συμβαίνει συγκόλληση. Κατά τη μελέτη των ορών τόσο σύμφωνα με την αρχική μέθοδο του Boyden όσο και σύμφωνα με τον Knight, οι αναστολείς και οι ετεροαιμοσυγκολλητίνες πρέπει πρώτα να αφαιρούνται από τον ορό.

Ο μηχανισμός του RNGA δεν είναι καλά κατανοητός. Από αυτή την άποψη, κατά την επιλογή των συνθηκών για την ευαισθητοποίηση των ερυθροκυττάρων με διαφορετικά αντιγόνα και αντισώματα, καθώς και κατά την επιλογή του τύπου των ερυθροκυττάρων, χρησιμοποιείται κυρίως μια εμπειρική προσέγγιση.

Η δραστηριότητα προσρόφησης των φυσικών ερυθροκυττάρων είναι χαμηλή, αλλά μπορεί να αυξηθεί με επεξεργασία των ερυθροκυττάρων με τανίνη, ακρολεΐνη, γλουταραλδεΰδη, διδιαζωτωμένες ενώσεις (συσσωματώματα αιμοσυγκόλλησης).

Για τη δημιουργία σταθερών φαρμάκων, αναπτύσσονται χημικές μέθοδοι. σύνδεση αντιγόνου ή αντισωμάτων στα ερυθρά αιμοσφαίρια, ιδίως με τη δημιουργία διαζωδεσμών. Για το σκοπό αυτό, για παράδειγμα, χρησιμοποιούνται διαζωτιωμένη βενζιδίνη, τολουολο-2,4-διισοκυανικό, υδατοδιαλυτό καρβοδιμίδιο, διφθοροδινιτροβενζόλιο. Περιγράφεται η χρήση του βοροφθοριούχου 4,4-διφαινυλοδιαζωνίου για την προσκόλληση πολυσυμπυκνωμένων αντισωμάτων σε ερυθροκύτταρα προβάτου για την ένδειξη παθογόνων παραγόντων της ρικέτσιωσης που μεταδίδεται από κρότωνες.

Το RNGA χρησιμοποιείται ευρέως στη βακτηριολογία. Για την πανώλη, τη χολέρα, τη βρουκέλλωση και την τουλαραιμία, χρησιμοποιούνται και οι δύο τύποι αντίδρασης για την οστρακιά, τη διφθερίτιδα και τη δυσεντερία.

Σε virusol. Στην έρευνα, το RNGA πραγματοποιήθηκε για πρώτη φορά με τους ιούς της παρωτίτιδας και της νόσου του Newcastle το 1946-1948, στη συνέχεια, μετά από σχεδόν δέκα χρόνια διακοπής, υπήρξαν αναφορές για την αναπαραγωγή αυτής της αντίδρασης με αδενοϊούς, ιό έρπητα, μυξοϊούς, ιό δαμαλίτιδας, αρβοϊούς , κυτταρομεγαλοϊοί, ιός αφθώδους πυρετού, λευχαιμία κοτόπουλου κ.λπ. Οι βέλτιστες συνθήκες αντίδρασης για διαφορετικούς ιούς επιλέγονται μεμονωμένα.

Για την αναγνώριση του ιού εγκεφαλίτιδα που μεταδίδεται από κρότωνεςΠεριγράφεται η αντίδραση όπως τροποποιήθηκε από τον Rytsay. Ερυθρά αιμοσφαίρια ευαισθητοποιημένα με ανοσοσφαιρίνη από άνοση στον ορό αλόγων σε εγκεφαλίτιδα που μεταδίδεται από κρότωνες χρησιμοποιούνται για να υποδείξουν ιούς από κρότωνες και σκωτσέζικη εγκεφαλίτιδα στην καλλιέργεια BHK-21. Για να γίνει αυτό, το υγρό που περιέχει τον ιό αραιώνεται σε διάλυμα 1% κανονικού ορού αλόγου με συντελεστή 2. 1-2 σταγόνες ευαισθητοποιημένων ερυθροκυττάρων προστίθενται σε 0,5 ml του αντιγόνου κάθε αραίωσης. Η αντίδραση λαμβάνεται υπόψη μετά από 1-2 ώρες. Το RNGA μπορεί να χρησιμοποιηθεί για την ανίχνευση του ιού της δαμαλίτιδας και της ευλογιάς τόσο σε εργαστηριακές καλλιέργειες όσο και σε πατόλ, υλικό από ασθενείς (υπόλοιπα και κρούστες).

Βιβλιογραφία: Gaidamovich S. Ya and Casale J. Συγκριτική μελέτη αντιγόνων αιμοσυγκόλλησης που παρασκευάστηκαν από καλλιέργειες ιστού και από τον εγκέφαλο ποντικών, Vopr, virusol., Νο. 2, σελ. 238, 1968; Levi M.I και Basova N.N. ιδιαίτερα επικίνδυνες λοιμώξεις, γ. 2, σελ. 207, Saratov, 1970; Noskov F. S. et al. Εφαρμογή έμμεσης αντίδρασης αιμοσυγκόλλησης για εργαστηριακή διάγνωση της ευλογιάς, Vopr, virusol., Νο. 3, σελ. 347, 1972;

Knight T. Ανίχνευση βοτουλινικής τοξίνης τύπου Α σε προϊόντα διατροφής με τη μέθοδο της ειδικής αιμοσυγκόλλησης, Bull. Πολωνός, ακαδ. Sciences, vol. 4, JsTs 9, p. 341, 1956.

S. Ya.

Πρόκειται για μια ορολογική αντίδραση κατά την οποία συγκεκριμένα αντιιικά αντισώματα, αλληλεπιδρώντας με τον ιό (αντιγόνο), τον εξουδετερώνουν και του στερούν την ικανότητα συγκόλλησης των ερυθρών αιμοσφαιρίων, δηλ. αναστέλλει την αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (HRTHA), η οποία σας επιτρέπει να τη χρησιμοποιήσετε για να προσδιορίσετε τον τύπο και ακόμη και τον τύπο των ιών που ανιχνεύονται κατά τη διάρκεια του HRA.

Αντίδραση προσφοράς. 0,25 ml αντιιικού ορού σε διαδοχικές διπλές αραιώσεις από 1:10 έως 1:2560 αναμιγνύονται με ίσο όγκο υλικού που περιέχει τον ιό, αραιωμένο 4 φορές λιγότερο από τον τίτλο που έχει καθοριστεί στο RGA. Το μίγμα ανακινείται και τοποθετείται σε θερμοστάτη για 30 λεπτά, μετά από τα οποία προστίθενται 0,5 ml ενός εναιωρήματος 1-2% ερυθρών αιμοσφαιρίων.

Η αντίδραση συνοδεύεται από 3 ελέγχους.

Τα αποτελέσματα καταγράφονται μετά τη δεύτερη επώαση σε θερμοστάτη για 30 ή 45 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Στο σωστή τοποθέτησηεμπειρία στην παρακολούθηση ορού και ερυθροκυττάρων, θα πρέπει να σχηματιστεί ένα "κουμπί" - δεν υπάρχει παράγοντας συγκόλλησης ερυθροκυττάρων. στον έλεγχο αντιγόνων, σχηματίζεται μια "ομπρέλα" - ο ιός προκάλεσε συγκόλληση των ερυθρών αιμοσφαιρίων.

Σε ένα πείραμα, εάν ο ορός είναι ομόλογος με τον ιό που μελετάται, σχηματίζεται ένα «κουμπί» - ο ορός έχει εξουδετερώσει τον ιό. Ο τίτλος ορού είναι η μέγιστη αραίωση στην οποία καθυστερεί η αιμοσυγκόλληση.

Έμμεση αντίδραση αιμοσυγκόλλησης

Η έμμεση (παθητική) αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (IRHA) βασίζεται στο γεγονός ότι τα ερυθρά αιμοσφαίρια, εάν ένα διαλυτό αντιγόνο προσροφηθεί στην επιφάνειά τους, αποκτούν την ικανότητα να συγκολλούνται όταν αλληλεπιδρούν με αντισώματα στο προσροφημένο αντιγόνο. Το RNGA χρησιμοποιείται ευρέως στη διάγνωση ενός αριθμού λοιμώξεων.

Ρύθμιση αντίδρασης. Ο ορός δοκιμής θερμαίνεται για 30 λεπτά στους 56 °C, αραιώνεται διαδοχικά σε αναλογία 1:10-1:1280 και χύνεται σε 0,25 ml σε δοκιμαστικούς σωλήνες ή φρεάτια, όπου 2 σταγόνες ερυθροκύτταρου diagnosticum (ερυθροκύτταρα με αντιγόνο προσροφημένο πάνω τους ) προστίθενται στη συνέχεια.

Εικ. 70 Σχήμα της παθητικής αντίδρασης αιμοσυγκόλλησης (RPHA).

Α - λήψη διαγνωστικού ερυθροκυττάρου. B -RPGA: 1-ερυθροκύτταρο: 2 - αντιγόνο υπό μελέτη: 3 - ερυθροκύτταρο diagnosticum; 4 - αντίσωμα στο αντιγόνο που μελετάται. 5 - συγκόλληση.

Έλεγχοι: εναιώρημα διαγνωστικού ερυθροκυττάρου με γνωστό ανοσοποιητικό ορό. αναστολή της διάγνωσης με φυσιολογικό ορό. ένα εναιώρημα φυσιολογικών ερυθρών αιμοσφαιρίων με δοκιμαστικό ορό. Στον πρώτο έλεγχο θα πρέπει να συμβεί συγκόλληση, στον δεύτερο και στον τρίτο δεν πρέπει να συμβεί.

Χρησιμοποιώντας το RNGA, είναι δυνατός ο προσδιορισμός ενός άγνωστου αντιγόνου εάν γνωστά αντισώματα προσροφηθούν σε ερυθροκύτταρα.

Η αντίδραση αιμοσυγκόλλησης μπορεί να πραγματοποιηθεί σε όγκο 0,025 ml (μικρομέθοδος) χρησιμοποιώντας μικροτιτλοδοτητή Takachi.

ΑΝΤΙΔΡΑΣΗ ΒΡΟΧΗΣ

Στην αντίδραση κατακρήμνισης, κατακρημνίζεται ένα ειδικό ανοσοσύμπλεγμα, που αποτελείται από ένα διαλυτό αντιγόνο (λύμα, εκχύλισμα, (απτέν) και ένα ειδικό αντίσωμα παρουσία ηλεκτρολυτών.

Ο θολός δακτύλιος ή το ίζημα που σχηματίζεται ως αποτέλεσμα αυτής της αντίδρασης ονομάζεται ίζημα. Αυτή η αντίδραση διαφέρει κυρίως από την αντίδραση συγκόλλησης στο μέγεθος των σωματιδίων του αντιγόνου.

Η αντίδραση κατακρήμνισης χρησιμοποιείται συνήθως για τον προσδιορισμό του αντιγόνου στη διάγνωση ενός αριθμού λοιμώξεων (άνθρακας, μηνιγγίτιδας, κ.λπ.). στην ιατροδικαστική - για τον προσδιορισμό του είδους του αίματος, του σπέρματος κ.λπ. σε υγειονομικές και υγειονομικές μελέτες - κατά τη διαπίστωση παραποίησης προϊόντων. με τη βοήθειά του προσδιορίζεται η φυλογενετική σχέση ζώων και φυτών. Για την αντίδραση χρειάζεστε:

1. Αντισώματα (ιζηματίνες) - άνοσος ορός με υψηλό τίτλο αντισωμάτων (όχι μικρότερο από 1:100.000). Ο τίτλος του κατακρημνιζόμενου ορού προσδιορίζεται από την υψηλότερη αραίωση του αντιγόνου με το οποίο αντιδρά.
Ο ορός χρησιμοποιείται συνήθως αδιάλυτος ή σε αραίωση 1:5-1:10.

2. Αντιγόνο - διαλυμένη πρωτεΐνη ή
λιποειδής πολυσακχαριδική φύση (πλήρη αντιγόνα και
απτένια).

3. Ισοτονικό διάλυμα.

Οι κύριες μέθοδοι για τη διεξαγωγή της αντίδρασης καθίζησης είναι: αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου και αντίδραση κατακρήμνισης σε άγαρ (γέλη).

Προσοχή! Όλα τα συστατικά που εμπλέκονται στην αντίδραση καθίζησης πρέπει να είναι απολύτως διαφανή.

Εικ. 71 Αντίδραση κατακρήμνισης: A - αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου. Β - Αντίδραση καθίζησης Ouchterlony

Αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου. Χρησιμοποιώντας μια πιπέτα Pasteur, προσθέστε 0,2 - 0,3 ml (5-6 σταγόνες) ορού στο σωληνάριο καθίζησης (ο ορός δεν πρέπει να μπει στα τοιχώματα του σωλήνα). Το αντιγόνο στον ίδιο όγκο επιστρώνεται προσεκτικά στον ορό, χύνοντάς τον με μια λεπτή πιπέτα Παστέρ κατά μήκος του τοιχώματος του δοκιμαστικού σωλήνα. Ο δοκιμαστικός σωλήνας διατηρείται σε κεκλιμένη θέση. Όταν τοποθετηθεί σωστά, θα πρέπει να υπάρχει ένα σαφές όριο μεταξύ του ορού και του αντιγόνου. Προσεκτικά, για να μην αναμειχθεί το υγρό, τοποθετήστε τον δοκιμαστικό σωλήνα σε μια βάση. Εάν η αντίδραση είναι θετική, σχηματίζεται ένας θολός «δακτύλιος» στη διεπιφάνεια του αντιγόνου και του αντισώματος - ένα ίζημα (βλ. Εικ. 48).

Η αντίδραση συνοδεύεται από έναν αριθμό μαρτύρων (Πίνακας 18). Η σειρά προσθήκης συστατικών αντίδρασης στον δοκιμαστικό σωλήνα είναι πολύ σημαντική. Δεν μπορείτε να στρώσετε ορό στο αντιγόνο (στον έλεγχο - σε ισοτονικό διάλυμα), καθώς η σχετική πυκνότητα του ορού είναι μεγαλύτερη, θα βυθιστεί στον πυθμένα του δοκιμαστικού σωλήνα και το όριο μεταξύ των υγρών δεν θα αποκαλυφθεί.

Σχέδιο για τη ρύθμιση της αντίδρασης κατακρήμνισης δακτυλίου

Πίνακας Νο. 13

Σημείωμα. + παρουσία "δαχτυλιδιού" - απουσία «δαχτυλιδιού».

Τα αποτελέσματα καταγράφονται μετά από 5-30 λεπτά, σε ορισμένες περιπτώσεις μετά από μία ώρα, όπως πάντα ξεκινώντας από τους ελέγχους. Ο «δακτύλιος» στον 2ο δοκιμαστικό σωλήνα υποδεικνύει την ικανότητα του ανοσοποιητικού ορού να εισέλθει σε μια συγκεκριμένη αντίδραση με το αντίστοιχο αντιγόνο. Δεν πρέπει να υπάρχουν "δαχτυλίδια" στους 3-5 δοκιμαστικούς σωλήνες - δεν υπάρχουν αντισώματα και αντιγόνα που να αντιστοιχούν μεταξύ τους. Ένας "δακτύλιος" στον 1ο σωλήνα - ένα θετικό αποτέλεσμα αντίδρασης - δείχνει ότι το αντιγόνο δοκιμής αντιστοιχεί στον ληφθέν ανοσοορό, η απουσία "δαχτυλιδιού" ("δαχτυλίδι" μόνο στον 2ο σωλήνα) υποδηλώνει την ασυμφωνία τους - αρνητικό αποτέλεσμααντιδράσεις.

Αντίδραση καθίζησης σε άγαρ (γέλη). Η ιδιαιτερότητα της αντίδρασης είναι ότι η αλληλεπίδραση αντιγόνου και αντισώματος λαμβάνει χώρα σε ένα πυκνό μέσο, ​​δηλ. σε ένα πήκτωμα. Το προκύπτον ίζημα δίνει μια θολή λωρίδα στο πάχος του μέσου. Η απουσία ζώνης υποδηλώνει διαφορά μεταξύ των συστατικών της αντίδρασης. Αυτή η αντίδραση χρησιμοποιείται ευρέως στη βιοϊατρική έρευνα, ιδιαίτερα στη μελέτη του σχηματισμού τοξινών στον αιτιολογικό παράγοντα της διφθερίτιδας.

Μελετήστε τη φύση της αλληλεπίδρασης του αντιγόνου με το αντίσωμα στην αντίδραση
καθίζηση σε άγαρ, σχεδιάστε το αποτέλεσμα (πάρτε ένα φλιτζάνι από τον δάσκαλό σας).

Υπάρχουν πολλές μέθοδοι για τον ποιοτικό και ποσοτικό προσδιορισμό των ειδικών για τον ιό αντισωμάτων. Χρησιμοποιώντας αυτές τις μεθόδους, μπορείτε να ανιχνεύσετε τόσο IgM όσο και IgG ταυτόχρονα και ξεχωριστά ανοσοσφαιρίνες κάθε κατηγορίας. Κατά κανόνα, μόνο η ειδική για τον ιό IgG ανιχνεύεται στην αντίδραση στερέωσης του συμπληρώματος. Ωστόσο, κατά τον έλεγχο μικροβιολογικών αντιγόνων με αυτή τη μέθοδο, είναι δυνατός ο ταυτόχρονος προσδιορισμός ειδικών IgM και IgG.

Οι ανοσολογικές μέθοδοι χρησιμοποιούνται κυρίως για δύο σκοπούς: πρώτον, για τη διάγνωση μιας τρέχουσας, ολοκληρωμένης ή συγγενούς ιογενούς λοίμωξης και, δεύτερον, για την ανίχνευση συγκεκριμένων αντισωμάτων, η παρουσία των οποίων υποδηλώνει προηγούμενη μόλυνση και, επομένως, ανοσία σε πιθανή επαναμόλυνση. Σύμφωνα με τη δύναμη της ανοσολογικής απόκρισης σε ιογενής λοίμωξηοι άνθρωποι είναι πολύ διαφορετικοί μεταξύ τους. Στο Σχ. Το σχήμα 3 δείχνει μια τυπική καμπύλη αύξησης τίτλου

αντισώματα ως απόκριση στην πρωτοπαθή μόλυνση από ερυθρά. Είναι εύκολο να παρατηρήσετε ότι η διάγνωση της ερυθράς είναι δυνατή με την αύξηση του τίτλου της ειδικής IgG και τον εντοπισμό ειδικών IgM. Η παρουσία ειδικής IgM στο αίμα ενός νεογνού υποδηλώνει ενδομήτρια λοίμωξη, καθώς η μητρική IgM, σε αντίθεση με την IgG, κατακρατείται από τον πλακούντα. Η ειδική IgG που παράγεται ως αποτέλεσμα της πρωτογενούς μόλυνσης συνήθως επιμένει καθ' όλη τη διάρκεια της ζωής. Επομένως, η παρουσία αντισωμάτων αυτής της κατηγορίας στον ορό του αίματος υποδηλώνει ανοσία στην αντίστοιχη επαναλαμβανόμενη μόλυνση.

Ακολουθούν ανοσολογικές μέθοδοι για την ανίχνευση συγκεκριμένων αντισωμάτων στον ιό της ερυθράς, οι οποίες είναι ιδιαίτερα αποτελεσματικές για τη διάγνωση της εμβρυϊκής νόσου και τον προσδιορισμό του τίτλου των ειδικών αντισωμάτων στον ορό του αίματος. Αναλυτικές ΠεριγραφέςΟι μέθοδοι που χρησιμοποιούνται για τη διάγνωση της ερυθράς μπορούν να βρεθούν σε κριτικές των Pattison και Morgan-Kapner.

Αντίδραση αναστολής αιμοσυγκόλλησης

Ο ιός της ερυθράς προκαλεί αιμοσυγκόλληση των ερυθρών αιμοσφαιρίων σε πολλά είδη ζώων. Τις περισσότερες φορές, ερυθροκύτταρα από νεοσσούς μιας ημέρας χρησιμοποιούνται στο RTGA. Το αιμοσυγκολλητικό αντιγόνο του ιού της ερυθράς σε αυτή την αντίδραση είναι ο ιός που αναπτύχθηκε σε καλλιέργεια και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με Tween 80 και αιθέρα. Η προκαταρκτική θεραπεία αυξάνει τον τίτλο GA του ιού.

5.1.1 Τυποποίηση του αντιγόνου ΗΑ του ιού της ερυθράς

1. 1 ml ενός εναιωρήματος 50% ερυθροκυττάρων κοτόπουλου πλένεται τρεις φορές σε ρυθμιστικό διάλυμα βερονάλης με δεξτράνη και ζελατίνη με φυγοκέντρηση και επαναιώρηση του ιζήματος σε βαθμονομημένο σωλήνα φυγοκέντρησης 15 ml. Τα πλυμένα κύτταρα επαναιωρούνται σε ρυθμιστικό διάλυμα DGV για να ληφθεί ένα εναιώρημα 30%.

Πίνακας 3. Παρασκευή ρυθμιστικού διαλύματος βερονάλης με δεξτράνη και ζελατίνη

1. Ρυθμιστικό διάλυμα DGV Ρυθμιστικό διάλυμα αντίδρασης στερέωσης συμπληρώματος 20 δισκία Veronal sodium 400 mg Ζελατίνη 1200 mg Απεσταγμένο νερό 2000 ml Διαλύστε τα δισκία σε απεσταγμένο νερό. Προστίθεται βερονάλ νατρίου και ζελατίνη. Τοποθετήστε σε λουτρό νερού στους 56 °C μέχρι να διαλυθεί τελείως η ζελατίνη. Ρίξτε σε μπουκάλια των 100 ml. Φυλάξτε σε αυτόκλειστο και φυλάξτε στους 4 °C

2. 25% BSA BSA, κλάσμα 5 25 g Αποστειρωμένο απεσταγμένο νερό 100 ml Αποστειρώστε με διήθηση, ρίξτε 1 ml σε αποστειρωμένες αμπούλες. Αποθηκεύεται στους -20 "C

3. 10% γλυκόζη Γλυκόζη 10 g Απεσταγμένο νερό 100 ml Ρίξτε σε 1 ml. Φυλάξτε σε αυτόκλειστο και φυλάξτε στους 4 °C

4. Για χρήση Ρυθμιστικό διάλυμα DGV 100 ml 25% BSA 0,8 ml 10% γλυκόζη 1,0 ml Φυλάσσεται στους 4°C

2. Αραιώστε το λυοφιλοποιημένο παρασκεύασμα του αντιγόνου GA του ιού της ερυθράς στον όγκο απεσταγμένου νερού που απαιτείται σύμφωνα με τις οδηγίες.

3. Προσθέστε 1 όγκο DGV σε καθένα από τα οκτώ φρεάτια δύο παρακείμενων σειρών μιας πλάκας μικροτιτλοδότησης πολυστυρενίου 96 φρεατίων με φρεάτια σχήματος U.

4. Ένας όγκος αντιγόνου GA του ιού της ερυθράς προστίθεται στα πρώτα φρεάτια των δύο σειρών.

5. Προετοιμάστε σειριακές διπλές αραιώσεις του αντιγόνου GA του ιού της ερυθράς, που κυμαίνονται από 1:2 έως 1:256, χρησιμοποιώντας μικροτίτλο 0,025 ml. Πριν από τη χρήση, η κεφαλή μικροτιτλοδότησης θα πρέπει να θερμανθεί σε φλόγα μέχρι να κοκκινίσει, στη συνέχεια να κρυώσει για λίγα δευτερόλεπτα, να τοποθετηθεί σε απεσταγμένο νερό και να σβήσει με διηθητικό χαρτί.

6. Προσθέστε έναν επιπλέον όγκο ρυθμιστικού διαλύματος DGV σε κάθε ένα από τα γεμάτα φρεάτια. Ως έλεγχος, δύο όγκοι ρυθμιστικού διαλύματος DGV προστίθενται στα φρεάτια 12 των δύο πρώτων σειρών.

7. Ένα εναιώρημα πλυμένων ερυθροκυττάρων κοτόπουλου αραιώνεται 100 φορές με ρυθμιστικό διάλυμα DGV, λαμβάνοντας έτσι ένα εναιώρημα 0,03%.

8. Προσθέστε δύο όγκους εναιωρήματος ερυθρών αιμοσφαιρίων 0,03% και στα 18 φρεάτια, καλύψτε την τελική πλάκα με μια άλλη, αχρησιμοποίητη πλάκα και επωάστε για 1 ώρα στους 4 °C.

9. Μια πυκνή «πλάκα» από μη συγκολλημένα ερυθροκύτταρα σχηματίζεται στον πυθμένα των φρεατίων ελέγχου. Τα συγκολλημένα ερυθρά αιμοσφαίρια καθιζάνουν ομοιόμορφα. Ο τίτλος GA θεωρείται ότι είναι ο αντίστροφος της υψηλότερης αραίωσης του αντιγόνου GA του ιού της ερυθράς, στην οποία εξακολουθεί να εμφανίζεται πλήρης συγκόλληση. Αυτή η αραίωση περιέχει 1 μονάδα αιμοσυγκόλλησης.

Για τον έλεγχο των ορών, χρησιμοποιούνται 4 μονάδες GA αντιγόνου του ιού της ερυθράς. Έτσι, εάν ο τίτλος GA του αντιγόνου είναι 32, τότε για την ανίχνευση αντισωμάτων στον ιό της ερυθράς αραιώνεται με DGV οκτώ φορές. Το αραιωμένο αντιγόνο είναι σταθερό για 25-48 ώρες στους 4 °C.

5.1.2 Προεπεξεργασία ορού γάλακτος

Όλοι οι οροί περιέχουν μη ειδικούς αναστολείς αιμοσυγκόλλησης που πρέπει να αφαιρεθούν. Οι μη ειδικοί αναστολείς GA είναι κυρίως λιποπρωτεΐνες, οι οποίες απελευθερώνονται με επεξεργασία του ορού γάλακτος με καολίνη. Επιπλέον, μη ειδικές συγκολλητίνες ερυθροκυττάρων κοτόπουλου μπορεί να υπάρχουν σε ανθρώπινους ορούς. Ωστόσο, δεν είναι απαραίτητη η προκαταρκτική απορρόφηση των δοκιμαστικών ορών από τα ερυθροκύτταρα, καθώς όλες οι μη ειδικές αιμοσυγκολλητίνες που υπάρχουν στους ορούς ανιχνεύονται στους μάρτυρες.

1. Προσθέστε 0,2 ml ορού σε αριθμημένους γυάλινους σωλήνες. Εκτός από τους δοκιμαστικούς ορούς, απαιτούνται θετικοί και αρνητικοί μάρτυρες σε κάθε πείραμα.

2. Προσθέστε 0,8 ml καολίνη 25% σε φυσιολογικό ορό ρυθμισμένο με βορικό σε κάθε δοκιμαστικό σωλήνα.

3. Το περιεχόμενο των δοκιμαστικών σωλήνων ανακινείται και αφήνεται σε θερμοκρασία δωματίου για 20 λεπτά.

4. Ο χρησιμοποιημένος καολίνης κατακρημνίζεται με φυγοκέντρηση σε επιτραπέζια φυγόκεντρο στις 2000 rpm για 20 λεπτά.

5. Το υπερκείμενο μεταφέρεται σε καθαρά αριθμημένα σωληνάρια. Ως αποτέλεσμα του καθαρισμού, λαμβάνονται οροί αραιωμένοι τέσσερις φορές. Χρησιμοποιούνται για την εκτέλεση της αντίδρασης αναστολής της αιμοσυγκόλλησης. Οι οροί μπορούν να αποθηκευτούν στους 4°C όλη τη νύχτα.

5.1.3 Αντίδραση αναστολής αιμοσυγκόλλησης

1. Για να ελέγξετε ένα δείγμα ορού, προσθέστε έναν όγκο DGV σε μία σειρά φρεατίων.

2. Προσθέστε έναν όγκο ορού αραιωμένο τέσσερις φορές στο πρώτο και το τελευταίο φρεάτιο.

3. Παρασκευάζονται σειριακές διπλές αραιώσεις ορού με τη χρήση μικροτιτλοδοτητή.

4. Ένας όγκος αντιγόνου ΗΑ ερυθράς που περιέχει 4 HAE προστίθεται στα φρεάτια 1-10. Το αντιγόνο HA της ερυθράς δεν προστίθεται στο φρεάτιο 12.

5. Ένας όγκος της αραίωσης εργασίας του αντιγόνου GA της ερυθράς προστίθεται στα φρεάτια 1-8 μιας άλλης πλάκας και στη συνέχεια παρασκευάζονται διαδοχικές διπλές αραιώσεις του αντιγόνου GA σε οκτώ φρεάτια. Ένας όγκος DGV προστίθεται σε αυτά τα 16 φρεάτια. Αυτή η τιτλοδότηση είναι μια δοκιμή για το αντιγόνο HA της ερυθράς. Για έλεγχο, δύο όγκοι DGV προστίθενται στα φρεάτια 12 της πρώτης και της δεύτερης σειράς.

6. Οι κλειστές πλάκες αφήνονται για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου ή όλη τη νύχτα στους 4 °C.

7. Δύο όγκοι ενός εναιωρήματος 0,03% ερυθροκυττάρων κοτόπουλου προστίθενται σε όλα τα γεμάτα φρεάτια και οι πλάκες αφήνονται για 1 - 1,5 ώρα στους 4 °C.

8. Κοιτάζοντας μέσα από τις πλάκες, προσδιορίστε τον τίτλο του αντιγόνου GA της ερυθράς. Δεν πρέπει να πραγματοποιείται συγκόλληση στα φρεάτια ελέγχου.

9. Εάν ο ορός συγκόλλησε ερυθρά αιμοσφαίρια απουσία αντιγόνου HA της ερυθράς, είναι απαραίτητο να επανεξεταστεί η αρχική αραίωση ορού. Πριν από αυτό, ο ορός προσροφάται με μία σταγόνα από ένα εναιώρημα 30% ερυθροκυττάρων κοτόπουλου για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου, και στη συνέχεια τα ερυθροκύτταρα καταβυθίζονται με φυγοκέντρηση.

10. Ο τίτλος των ειδικών αντισωμάτων στον ορό δοκιμής θεωρείται ότι είναι η αμοιβαία τιμή της αραίωσης στην οποία η αιμοσυγκόλληση καταστέλλεται πλήρως.

5.1.4 Ερμηνεία αποτελεσμάτων

Σε χαμηλό τίτλο, είναι δύσκολο να ερμηνευτούν τα αποτελέσματα, καθώς με μια μικρή αραίωση είναι δυνατή η υπολειμματική παρουσία μη ειδικών αναστολέων. Η παρουσία ειδικών για τον ιό αντισωμάτων θεωρείται αποδεδειγμένη όταν ο τίτλος είναι 16 ή μεγαλύτερος.

Αντίδραση αναστολής της αιμοσυγκόλλησης. Μηχανισμός. εξαρτήματα. Εφαρμογή

(RTGA) είναι μια μέθοδος για τον εντοπισμό ενός ιού ή την ανίχνευση αντιιικών αντισωμάτων στον ορό αίματος ενός ασθενούς, με βάση το φαινόμενο της απουσίας συγκόλλησης των ερυθρών αιμοσφαιρίων από ένα φάρμακο που περιέχει έναν ιό παρουσία ορού αίματος που είναι ανοσοποιημένο σε αυτόν.

Αντίδραση αναστολής αιμοσυγκόλλησης (RTGA)βασίζεται στον αποκλεισμό, την καταστολή των ιικών αντιγόνων από τα αντισώματα του ανοσοποιητικού ορού, με αποτέλεσμα οι ιοί να χάνουν την ικανότητά τους να συγκολλούν τα ερυθρά αιμοσφαίρια.

Χρησιμοποιείται RTGAγια τη διάγνωση πολλών ιογενών ασθενειών, οι αιτιολογικοί παράγοντες των οποίων (ιοί γρίπης, ιλαρά, ερυθρά, εγκεφαλίτιδα που μεταδίδεται από κρότωνες κ.λπ.) μπορούν να συγκολλήσουν τα ερυθρά αιμοσφαίρια διαφόρων ζώων.

Μηχανισμός. Ο προσδιορισμός του ιού πραγματοποιείται στην αντίδραση αναστολής της αιμοσυγκόλλησης (HRI) με ένα σύνολο τυποειδικών ορών. Τα αποτελέσματα της αντίδρασης λαμβάνονται υπόψη από την απουσία αιμοσυγκόλλησης. Οι υποτύποι του ιού Α με αντιγόνα H 0 N 1, H 1 N 1, H 2 N 2, H 3 N 2 και άλλα μπορούν να διαφοροποιηθούν σε RTGA με ένα σύνολο ομόλογων τυποειδικών ορών.

Αντίδραση καθίζησης. Μηχανισμός. εξαρτήματα. Μέθοδοι σταδιοποίησης. Εφαρμογή

Αντίδραση καθίζησης (RP)- Αυτός είναι ο σχηματισμός και η καθίζηση ενός συμπλέγματος διαλυτού μοριακού αντιγόνου με αντισώματα υπό μορφή θολότητας, που ονομάζεται ίζημα. Σχηματίζεται με ανάμειξη αντιγόνων και αντισωμάτων σε ισοδύναμες ποσότητες. η περίσσεια ενός από αυτά μειώνει το επίπεδο σχηματισμού ανοσολογικού συμπλέγματος.

Το RP έχει οριστείσε δοκιμαστικούς σωλήνες (αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίου), σε γέλες, θρεπτικά μέσα κ.λπ. Έχουν γίνει ευρέως διαδεδομένες ποικιλίες RP σε ημι-υγρό άγαρ ή γέλη αγαρόζης: διπλή ανοσοδιάχυση σύμφωνα με το Ouchterlony, ακτινική ανοσοδιάχυση, ανοσοηλεκτροφόρηση κ.λπ.

Μηχανισμός. Πραγματοποιείται με διαφανή κολλοειδή διαλυτά αντιγόνα που εξάγονται από παθολογικό υλικό, αντικείμενα εξωτερικό περιβάλλονή καθαρές βακτηριακές καλλιέργειες. Η αντίδραση χρησιμοποιεί διαυγείς διαγνωστικούς ορούς καθίζησης με υψηλούς τίτλους αντισωμάτων. Ο τίτλος του κατακρημνιζόμενου ορού λαμβάνεται ως η υψηλότερη αραίωση του αντιγόνου, το οποίο, όταν αλληλεπιδρά με τον άνοσο ορό, προκαλεί το σχηματισμό ενός ορατού ιζήματος - θολότητας.

Αντίδραση κατακρήμνισης δακτυλίουτοποθετείται σε στενούς δοκιμαστικούς σωλήνες (διάμετρος 0,5 cm), στους οποίους προστίθενται 0,2--0,3 ml ορού καταβύθισης. Στη συνέχεια, χρησιμοποιώντας μια πιπέτα Pasteur, στρώνονται αργά 0,1-0,2 ml διαλύματος αντιγόνου. Οι δοκιμαστικοί σωλήνες μεταφέρονται προσεκτικά σε κάθετη θέση. Η αντίδραση καταγράφεται μετά από 1-2 λεπτά θετική αντίδρασηεμφανίζεται ένα ίζημα με τη μορφή λευκού δακτυλίου στο όριο μεταξύ του ορού και του υπό μελέτη αντιγόνου. Δεν σχηματίζεται ίζημα στους σωλήνες ελέγχου.